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在pcr实验室的管理中应尽量避免污染产生,如果不慎产生了污染也有对应的处理方法,接下来中南实验室建设针对这一情况,如下给大家总结了关于pcr实验室污染的处理方法以及pcr实验室操作需要注意的事项的总结:
第一:修饰:标记遗传物质,阻止聚合酶与核酸的结合,从而抑制DNA扩散(效果相对较好)。
第二:酒精擦拭:将核酸沉淀,擦拭后保证污染表面污染得到一定程度的缓解(简单、方便、成本低)。
第三:紫外照射:PCR产物中嘧啶碱基会形成二聚体,延伸终止(方便、范围广、成本低)。
第四:酶解酶可将长链的核酸分子降解成小片段(速度快、效果效果相对相对较好)。
第五:高压变性:高压可以将核酸降解成20-30bp的小片段(彻底、成本低)。
PCR实验操作注意事项
尽管扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应的原因,样品间的交叉污染也是原因之一。因此,不仅要在进行扩增反应是谨慎认真,在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注意:
1、尽可能用可替换或可高压处理的加样器,由于加样器最容易受产物气溶胶或标本DNA的污染,最好使用可替换或高压处理的加样器。如没有这种特殊的加样器,至少PCR操作过程中加样器应该专用,不能交叉使用,尤其是PCR产物分析所用加样器不能拿到其它两个区;
2、避免反应液飞溅,打开反应管时为避免此种情况,开盖前稍离心收集液体于管底。若不小心溅到手套或桌面上,应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面;
3、戴一次性手套,若不小心溅上反应液,立即更换手套;
4、最后加入反应模板,加入后盖紧反应管;
5、使用一次性吸头,严禁与PCR产物分析室的吸头混用,吸头不要长时间暴露于空气中,避免气溶胶的污染;
6、操作多份样品时,制备反应混合液,先将dNTP、缓冲液、引物和酶混合好,然后分装,这样即可以减少操作,避免污染,又可以增加反应的精确度;
7、操作时设立阴阳性对照和空白对照,即可验证PCR反应的可靠性,又可以协助判断扩增系统的可信性;
8、重复实验,验证结果,慎下结论。
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